Metody

CTC Atlas prezentuje obrazy i dane uzyskane za pomocą zaawansowanych technik obrazowania molekularnego, w tym cytometru przepływowego z funkcją obrazowania (ang. Imaging Flow Cytometry, ImFC), który łączy możliwości cytometrii przepływowej i mikroskopii fluorescencyjnej. Cały proces rozpoczyna się od pobrania próbki krwi obwodowej lub krwi drenującej guz do probówek z EDTA (1), odrzucając pierwsze 2 mL w celu uniknięcia kontaminacji komórkami skóry (w przypadku krwi obwodowej). Frakcję jednojądrzastych komórek krwi (ang. (peripheral) blood mononculear cells, (P)BMCs) potencjalnie zawierającą także krążące komórki nowotworowe (CTC) izoluje się za pomocą gradientu gęstości (Histopaque®-1077) (2).

Następnie komórki są utrwalane w 4% formaldehydzie (3) i przechowywane w -80 °C do dalszej analizy (4). Przed akwizycją próbki są barwione koktajlem przeciwciał dobranych w zależności od panelu wyselekcjonowanych markerów (5), a jądra wybarwiane DAPI. Tak przygotowane komórki są analizowane z użyciem platformy Amnis® ImageStream® X Mk II, która umożliwia jednoczesną akwizycję obrazów fluorescencyjnych i jasnego pola (6). Uzyskane dane pozwalają na identyfikację rzadkich populacji CTC i ich szczegółową analizę pod kątem fenotypów i cech morfologicznych (7).